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2021-07-27
41、跑电泳的时候配的胶总是“缩”是什么原因呢？是有的成分不对吗？答：没什么问题，就是你胶里的水分被蒸发了。过夜时拿保鲜膜包起来，在里面加点水保持湿度就可以了；也可能母液（30%聚丙酰胺）有问题，你可以重新配制一份观察；能够替换的试剂，尽量换一下，选用好的试剂。42、蛋白质的分子量跨度很大，如要分离小21KD，中至66KD，大至170KD，可以一次做好吗？答：这么广的分布不好转移，一般建议：21kd和66kd可以一起转，12％SDS-PAGE，湿转120mA，45-60min...2021-07-27
Westernblot实验过程中常见问题汇总及处理方案。21、想分离的蛋白是分子量200kd的，SDS-PAGE电泳的分离胶浓度多大合适？浓缩胶的浓度又该用多少？这么大分子量的蛋白容易作WesternBlot吗？答：分离胶用7％，浓缩胶3.5％，200kd的蛋白不好做。22、如果上样量超载，要用什么方法来增加上样量？答：可以浓缩样品，也可以根据你的目标分子量透析掉一部分小分子蛋白。一般地，超载30％是不会有问题的。如果已经超了不少了，而且小分子量的也要，可以考虑加大胶的厚度，...2021-07-27
Westernblot实验过程中常见问题汇总及处理方案。1、westernblot的优点及缺点答：优点：灵敏，特异性高，常规可达ng级，Ecl显色法理论上可达pg级。缺点：通量有限。2、为什么我的细胞提取液中没有目标蛋白？答：原因有很多：首先排除WB过程是不是抗体的问题，重新实验、更换抗体；其次排除蛋白是否降解，提取的时候需要加入蛋白酶抑制剂，a)你的细胞中不表达这种蛋白质，换一种细胞；最后考虑此种细胞是否表达该蛋白，表达量高低。3、提取液有的有沉淀，有的很清亮，为什么呢？答...2021-07-27
染色质免疫沉淀（chromatinimmunoprecipitationassay,ChIP）是目前研究体内DNA与蛋白质相互作用的方法。它的基本原理是在活细胞状态下固定蛋白质－DNA复合物，并将其随机切断为一定长度范围内的染色质小片段，然后通过免疫学方法沉淀此复合体，特异性地富集目的蛋白结合的DNA片段，通过对目的片断的纯化与检测，从而获得蛋白质与DNA相互作用的信息。ChIP不仅可以检测体内反式因子与DNA的动态作用，还可以用来研究组蛋白的各种共价修饰与基因表达的关系。而...2021-07-27
分子生物学主要研究具体生物大分子在某一生物学行为过程中的表达变化、功能和作用方式；主要涉及基因的表达调控、蛋白相互作用、信号分子间的交互对话等。分子生物学实验常需要我们在具体实验前对所关注的基因的一些基本信息、可能受哪些因素调控、与哪些分子可能存在潜在的相互作用，可能参与哪些生物学行为等进行一些初步的判断，然后根据这些信息，提出合理的实验设计，并通过生物学实验加以验证。那么，如何获得上面的这些信息，除了根据实验结果提供的线索和深入研究相关文献以外，还会用到一些分子生物学数据库...