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2021-08-02
1、样本准备过程中防止蛋白质降解和保留翻译后修饰样本准备过程中，细胞会释放蛋白酶和/或去磷酸化酶，为了减少这些酶的活性，处理样本的过程应在冰上进行，并预先冷却所有缓冲液，并且建议用含蛋白酶和磷酸酶抑制剂的裂解缓冲液。2、磷酸化特异性抗体的选择选择磷酸化特异性抗体时，选择所要检测位点的磷酸化抗体至关重要。磷酸化都会使蛋白质的分子量增加80Da，检查抗体是否检测到磷酸化靶蛋白的分子量正确的条带也很重要。3、诱导磷酸化课题设计可能需要在收获前刺激细胞，以确保蛋白质被磷酸化。例如，在...2021-08-02
蛋白转印的方法蛋白转印可选择传统湿转、半干转或快速半干转方法。湿转系统：适用于大多数各种分子量的常规蛋白转印。转印过程中凝胶和膜被浸入充满转印缓冲液的槽中。半干转系统：凝胶和膜被夹在预先润湿缓冲液的滤纸之间，滤纸与平板电极直接接触。半干转系统的安装使用比湿转简单。快速转印系统：快速转印系统是最近发展出来的技术，使用专用设备、专用滤纸及专用缓冲液来快速有效地转印蛋白。通常滤纸和湿润的膜预先放在一次性包装中，简化了转印“三明治”的组装。转印缓冲液转印缓冲液包含强导电性化学缓冲试剂...2021-07-30
中山大学药学院于7月27日发布通报，该院2021年7月27日发生一起实验安全事故，实验=室在清理通风柜时发现之前毕业生遗留在烧瓶内的未知白色固体，一博士研究生用水冲洗时发生炸裂，炸裂产生的玻璃碎片刺破该生手臂动脉血管，送医救治伤情得到控制，无生命危险。与实验室负责老师沟通分析，导致炸裂的未知白色固体中可能含有氢化钠或氢化钙，遇水发生剧烈反应而炸裂。实验室的瓶瓶罐罐清洗是科研工作者最日常的工作，但是，如果你并不确定瓶内装的是什么东西，千万不要随意就拿去清洗！有些化学品遇水会发生...2021-07-29
研究人员发现，尽管大脑通过中脑产生5-羟色胺的神经元来调节快感和饥饿感的进食，但每种进食方式都是由自己独立的电路连接的，不影响其他类型的进食方式。美国疾病控制与预防中心(CentersforDiseaseControlａndPrevention)的数据显示，无论是由饥饿还是愉悦引起的暴饮暴食，通常都会导致肥胖。美国约42%的成年人都患有肥胖症。一个由贝勒医学院(BaylorCollegeofMedicine)的研究人员领导的国际研究小组在动物模型上研究了大脑是如何调节饥饿或其...2021-07-29
基本原理：外源目的DNA与载体分子的连接称为DNA重组，重组的DNA称为重组体或重组子。研究中需要克隆或表达的基因为外源DNA，载体是指能够携带外源基因进入受体细胞，并在其中进行扩增或诱导外源基因表达的工具，其中质粒载体最为常用。质粒是独立于细菌染色体外具有自我复制的DNA分子。所有的质粒都有复制子、选择性标志和多克隆位点3个共同的特性。质粒载体的选择包括载体的大小、载体拷贝数、多接头以及筛选插入片段的能力，pcDNA3.1（+/-）是比较常用的真核表达载体。基本步骤：1、目...2021-07-29
CCK8全称CellCountingKit-8，是一种基于WST-8（化学名为2-（2-甲氧基-4-硝基苯）-3-（4-硝基苯）-5-（2,4-二磺基苯）-2H-四唑单钠盐）的应用于细胞增殖和细胞毒性的快速、高灵敏度检测试剂盒。其工作原理类似于MTT，在电子耦合试剂存在的情况下，WST-8可以被线粒体内的脱氧酶还原生成高度水溶性的橙黄色的甲臜产物（formazan）。颜色的深浅与细胞的数量有关。CCK8法在药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性实验、肿瘤药敏试验以及生物因子的活性检...