2021-08-19
细菌处于容易接受外源DNA的状态称之为感受态，通过物理或化学的方法，人工诱导细菌细胞成为敏感的感受态细胞是重组DNA转化细菌技术的关键。制备出感受态细胞，我们就可以方便的将需要克隆的质粒导入其中，使其繁殖，从而获得大量的质粒。CaCl2转化法是常用的感受态细胞制备方法，其制备流程简单，快捷，成本低，并且能够满足普通的转化和克隆的需求。判断感受态细胞制备的优劣主要是通过转化效率来检测。经转化外源质粒DNA的大肠杆菌在含抗性的LB平板过夜培养后，平板上长满克隆且阴性对照（未转入外...
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2021-08-16
CRISPR/Cas系统是原核生物的一种天然免疫系统，存在于大多数细菌和古生菌中。原核生物在遭到病毒入侵后，能够把病毒DNA的一小段提取出来并存储到自身基因组上的特定区域，我们把这个区域称为CRISPR存储空间。当再次遇到病毒入侵时，原核生物能够根据存储的DNA片段识别病毒，将病毒的DNA切断而使之失效。目前应用*泛的CRISPR/Cas系统是来源于酿脓链球菌(Streptococcuspyogenes)的CRISPR/Cas9系统。天然的CRISPR-Cas9系统由三部分组...
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2021-08-13
分子成像的发展：1999年，美国哈佛大学Weissleder等人提出了分子影像学（molecularimaging）的概念——应用影像学方法，对活体状态下的生物过程进行细胞和分子水平的定性和定量研究。传统成像大多依赖于肉眼可见的身体、生理和代谢过程在疾病状态下的变化，而不是了解疾病的特异性分子事件；分子成像则是利用特异性分子探针追踪靶目标并成像。这种从非特异性成像到特异性成像的变化，为疾病生物学、疾病早期检测、定性、评估和治疗带来了重大的影响。分子成像技术使活体动物体内成像成...
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2021-08-12
提取质粒DNA的方法有很多种，从提取产量上分可分为微量提取、中量提取、大量提取，从使用仪器上分可分为一般提取和试剂盒方法提取，从具体操作方法分可以分为碱裂解法、煮沸法等，各种不同的方法各有其优缺点，根据不同的实验目的可以采用合适的提取方法。碱裂解法：使用碱与SDS裂解法从E.coli（大肠杆菌）中分离制备质粒DNA已有30多年的历史。将细菌悬浮液暴露于高pH值的强阴离子洗涤剂中，会使细胞壁破裂，染色体DNA和蛋白质变性，将质粒DNA释放到上清中。碱性溶剂使碱基配对*破坏，闭环...
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2021-08-12
RNA免疫共沉淀（RNAimmunoprecipitation，RIP）是一种基于抗体的技术，用于定位体内的RNA-蛋白质相互作用。将所关注的RNA结合蛋白(RBP)与其结合的RNA一起进行免疫沉淀，鉴定结合转录RNA（mRNA、非编码RNA或病毒RNA），可以通过实时PCR、微阵列或测序检测。表观遗传学和RNA生物学领域对不同RNA作用和功能的关注大大增加。据观察，RNA的功能远不止转录和后续的翻译。例如，RNA-蛋白质相互作用能够调控mRNA和非编码RNA的功能。对RNA...
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2021-08-11
细胞凋亡（apoptosis）指为维持内环境稳定，由基因控制的细胞自主的有序的死亡。细胞凋亡与细胞坏死不同，细胞凋亡不是一件被动的过程，而是主动过程，它涉及一系列基因的激活、表达以及调控等的作用，它并不是病理条件下，自体损伤的一种现象，而是为更好地适应生存环境而主动争取的一种死亡过程。下面介绍几种常用的检测细胞凋亡的方法。一、TUNEL法脱氧核糖核苷酸衍生物digoxin在TdT酶的作用下，可以掺入到凋亡细胞双链或单链DNA的3-OH末端，与dATP形成异多聚体，并可与连接了...
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2021-08-11
细胞周期（cellcycle）是指细胞从一次分裂完成开始到下一次分裂结束所经历的全过程，分为间期与分裂期两个阶段。间期又分为三期、即DNA合成前期（G1期）、DNA合成期（S期）与DNA合成后期（G2期）。细胞分裂期又称M期。细胞通过M期一分为二，有的可继续分裂进行周期循环，有的转入G0期。G0期是脱离细胞周期暂时停止分裂的一个阶段。但在一定适宜刺激下，又可进入周期（图1），合成DNA与分裂。G0期的特点为：在未受刺激的G0细胞，DNA合成与细胞分裂的潜力仍然存在；当G0细胞...
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