厌氧菌的几种培养方法

厌氧菌在有氧环境中无法生长，因此需要无氧环境。为了创造这种环境，通常会在培养基中加入还原剂，或者通过物理和化学方法去除环境中的游离氧，以降低氧化还原电势。以下是几种常见的厌氧菌培养方法：
疱肉培养基法 
这是简单的厌氧培养方法之一，不需要特殊设备。将疱肉和肉汤装入大试管中，液面用凡士林封闭，从而创造无氧环境。使用前，将装有培养基的试管放入沸水浴中加热10-20分钟，以释放溶解氧。
厌氧罐法 
这是一种应用广泛的方法，通过物理化学法在罐内创造厌氧环境。厌氧罐法分为两种：
抽气换气法 
适用于一般实验室，经济实惠且能迅速建立厌氧环境。标本接种后，将平板放入厌氧罐中，拧紧盖子，用真空泵抽出罐中空气，使压力真空表至-79.98KPa。停止抽气后，充入高纯氮气使压力真空表指针回0位。连续反复3次，在罐内-79.98KPa情况下，充入70%N2、20%H2、10%CO2（或20%CO2、80%H2）。罐中放入冷催化剂钯粒，催化罐中残余O2和H2化合成水。罐中放美蓝指示管，有氧呈蓝色，无氧红色。临用前将美蓝煮沸使变无色，放入罐中先呈浅蓝色，待罐中无氧环境形成，美蓝即持续无色。
气体发生袋法 
袋由锡箔密封，含有两种药片，枸椽酸和重碳酸氢钠，另一种含有硼氢药片。前者遇水放出二氧化碳，后者可释放氢。使用时在袋右上角剪一小口，灌进10mL蒸馏水，立即放入含有钯粒、指示剂及平板培养基的厌氧罐中，拧紧盖2-3分钟盖子微热并少量水蒸气出现。密封1小时左右罐中O2含量可低于1%。
厌氧袋法 
即在塑料袋内创造厌氧环境来培养厌氧菌。该方法适用于实验室或外出采样、现场接种等。原理与气体发生袋法相同，只是采用塑料袋代替了厌氧罐。气袋为一透明而密闭的塑料袋，内装有气体发生管（有硼氢的碳酸氢钠固体以及5%柠檬酸安瓿）、美兰指示剂管、钯催化剂管、干燥剂。首先将接种的平板培养基放入袋中，挤出袋内空气，然后密封袋口。先折断气体发生管，20分钟后再折断美兰指示剂管，如果指示剂不变蓝色，说明袋内达厌氧状态，即可放入37℃进行培养。
厌氧手套箱法 
这是一整套系统，是最佳厌氧菌培养方法，通常用于厌氧细菌的大量培养研究。厌氧手套箱是一个密闭的大型箱，前部是有机玻璃面板，板上装有两个手套，可通过手套在箱内操作。厌氧手套箱可调节温度，本身是孵育箱或孵育箱即附在内，还可放入解剖显微镜便于观察厌氧菌落。使用时应严格遵守操作规程，保证箱内气体比例合理。

1. 氢气

氢气是厌氧培养箱中常用的气体之一。它可以束缚氧气，创造无氧条件。同时，氢气还可促进细菌进行呼吸代谢，使其更适应于厌氧环境。需要注意的是，氢气是易燃易爆的气体，所以在使用时一定要注意安全。

2. 二氧化碳

二氧化碳在厌氧培养箱中也是常用的气体之一。它可以调节培养液的pH值和缓冲作用，提供相对稳定的环境。此外，二氧化碳还与氢气相互作用，形成二氧化碳气氛，进一步保证厌氧生长环境。

3. 氮气

氮气在厌氧条件下不会引入氧气，使得细菌可以在消耗体外溶氧之后继续生长。此外，氮气通过对压力进行调节，负责维持厌氧培养箱中的压力范围。

1. 气体的纯度必须得到保证，否则细菌不仅不能正常生长，还可能受到有害物质的影响。

2. 气体的使用量、比例和时间等参数必须严格控制，以免对生长环境产生负面影响。

3. 气体的供应管路必须检查是否畅通，以保证气体可控。

4. 在使用氢气时，必须注意安全。使用前应进行漏气检测，并严格遵守操作规程。

5. 在操作过程中需要注意无菌技术，以免细菌污染。